Разделение пигментов методом бумажной хроматографии 

Объём: 11 стр.
Не указано
Скачать этот отчёт

Совершенствование техники спектрофотометрических измерений позволило уточнить коэффициенты полученных ранее формул. А также сделало возможным определение в суммарном субстрате пигментов не только хлорофиллов а и в, но и каротиноидов (мг/л) в 80 % ацетоне.

С а = 12,21*А663 – 2,81*А646

С в = 20,13*А646 – 5,03*А663

Скар = (1000*А470 – 3,27*Са -100*Св)/229

Таблица 1 Величины оптической плотности

Рассчитали концентрацию пигментов, полученные данные занесли в таблицу 2.

Таблица 2 Концентрация пигментов в вытяжке

Вычислили содержание пигментов в вытяжке, тут же посчитали их содержание с учетом объема, массы пробы и разведения.

Fа = 9*20/1000*1 = 0,18г/г

Fв = 67,4*20/1000*1 = 1,35 мг/г

Fкар = -17*20/1000*1 = -0,34 мг/г

Нанесение пигментов на бумагу

Для разделения пигментов используют лист бумаги размером 16х16 см.

При одномерной хроматографии 1 мл полученной вытяжки наносят полосой длиной 12 см на расстоянии 2 см от нижнего края листа. Нанесли 1,4 мл образца.

Разделение пигментов на одномерной хроматограмме

На одномерной хроматограмме в зависимости от применяемой для разгонки смеси растворителей удается отделить каротин, ксантофиллы и хлорофилл а и в.

Хроматограмму помещают в камеру, заполненную 30 мл смеси, состоящей из бензола и петролейного эфира (2:1). Через 30-40 минут, когда фронт растворителя поднимется на 14 см и будет видно четкое разделение пигментов, хроматограмму вынимают и подсушивают. Самую верхнюю полосу образует каротин, ниже него лежит хлорофилл а, под ним распологаются ксантофиллы, а самый последний – хлорофилл в.

Окрашенные полосы, соответствующие пигментам вырезают, измельчают и переносят в отдельные бюксы на 25 мл. Каротин эллюируется хлороформом, ксантофиллы и хлорофиллы – смесью спирта с ацетоном (1:3).

Растворитель добавляют небольшими порциями, каждый раз настаивая 2-3 минуты.

Эллюция пигментов с бумажного носителя

Эллюцию проводят до полного обесцвечивания бумаги. Элюат фильтруется через стеклянный фильтр или центрифугируется для удаления взвешенных частиц бумаги. Экстракт аккуратно сливают в мерные пробирки и доводят до 5-10 мл в зависимости от интенсивности окрашивания. Полученные экстракты используют для фотоколориметрии с использованием калибровочной кривой, построенной для определенного прибора.

Для получения калибровочных кривых использовали два раствора – раствор Гетри (для зеленых пигментов) и двухромовокислый калий (для желтых пигментов).

Определение оптической плотности пигментов

Оптическую плотность элюата определяют на фотоэлектроколориметре, за синим светофильтром для желтых пигментов и красным для зеленых. Желательно работать в средней области шкалы, где относительная ошибка прибора минимальна.

Оптическая плотность элюата

Перед тем, как рассчитать содержание пигментов, была построена калибровочная кривая. Использовали раствор известной концентрации 1% CuSO4*5H2O – 25,5 мл; 2%К2Сr2O7 – 50 мл; 7% - NН4ОН (100мл раствора).

Скачать полную версию
Статьи по теме
Отчёт по практике переводчика
медицина
Отчёт по практике переводчика

Внешние связи государства на сегодняшний день находятся на довольно высоком уровне, благодаря чему профессия переводчика в настоящее время востребована как никогда...

Отчет по производственной практике по ветеринарии
Популярное
Отчет по производственной практике по ветеринарии

Каждому студенту после прохождения производственной практики необходимо будет внимательно ознакомиться со всей собранной информацией, проанализировать ее и уже, затем нужно будет по ней писать работу. А вот студентам ветеринарного факультета...

Что писать в выводе в отчёте по производственной практике?
Популярное
Что писать в выводе в отчёте по производственной практике?

Отчет по практике, как правило, состоит из четырех частей: введения, описания организации, основной части и вывода. Но далеко не каждый студент знает, что самой сложной из них считается вывод...